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依據(jù)與硅膠膜離心柱相同的原理(Boom, 1990),運(yùn)用納米技術(shù)對(duì)超順磁性納米顆粒的表面進(jìn)行改良和表面修飾后,制備成超順磁性氧化硅納米微球(Superparamagnetic Silica Nanoparticles,簡(jiǎn)稱磁珠)。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識(shí)別和高效結(jié)合。利用氧化硅納米微球的超順磁性,在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場(chǎng)的作用下,能從血液、動(dòng)物組織、食品、病原微生物等樣本中的DNA和RNA分離出來,可應(yīng)用在臨床疾病診斷、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、環(huán)境微生物檢測(cè)、食品安全檢測(cè)、分子生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域。
AllMag?核酸純化試劑盒采用自主研發(fā)的對(duì)核酸具有特異吸附的超順磁性氧化硅納米微球和獨(dú)特的試劑體系,提取和純化全血、組織等樣本中的基因組DNA、法醫(yī)樣本DNA,提取的DNA純度高、無蛋白質(zhì)和核酸酶的污染,可直接用于限制性酶切、測(cè)序、PCR擴(kuò)增、STR分析等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。AllMag?核酸純化試劑盒配合自動(dòng)化儀器可實(shí)現(xiàn)核酸的自動(dòng)化、高通量提取。
全血DNA試劑盒(胍鹽法):
AllMag?全血基因組DNA純化試劑盒采用自主研發(fā)的對(duì)核酸具有特異吸附的超順磁性氧化硅納米微球(簡(jiǎn)稱磁珠)和獨(dú)特的試劑體系,是專為全血基因組DNA純化而設(shè)計(jì)的產(chǎn)品,無需使用蛋白酶K?;蚪MDNA提取的得率高、純度好、重復(fù)性和穩(wěn)定性好,回收的基因組DNA可直接用于限制性酶切、測(cè)序、PCR擴(kuò)增等后續(xù)實(shí)驗(yàn),非常適合于全血基因組DNA的自動(dòng)化提取。
? 操作快捷方便
AllMag?磁珠磁含量高,與基因組DNA結(jié)合后能被磁場(chǎng)快速分離,不需要離心和頻繁更換離心管等操作,樣本裂解和核酸結(jié)合同時(shí)進(jìn)行,減少了實(shí)驗(yàn)步驟,整個(gè)操作過程只需35分鐘。
? DNA得率高
AllMag?磁珠經(jīng)過獨(dú)特的表面修飾,結(jié)合核酸能力更強(qiáng),基因組DNA的平均提取量為>4μg/200μl健康成年人全血。
? DNA純度好
AllMag?磁珠,在緩沖液中的懸浮性和分散性好,能和洗滌液充分接觸,高效去除PCR抑制因子和鹽分,提取的DNA中不含RNA和蛋白質(zhì)等雜質(zhì),保證DNA質(zhì)量。
? 性價(jià)比高
不需要使用蛋白酶K,同時(shí)保證DNA的提取量和純度,極大地提高了產(chǎn)品的性價(jià)比。
? 試劑安全環(huán)保
試劑體系不含苯酚、氯仿等有毒試劑,廢液不需特殊處理,讓工作環(huán)境更安全舒適。
? 提取不同體積的全血樣本
10μl、50μl、100μl、150μl、200μl和300μl全血分別用AllMag?全血基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。提取的基因組DNA用100μl洗脫液洗脫,每個(gè)條件下的樣品重復(fù)2次。提取的基因組DNA取1μl用于PCR擴(kuò)增D12S391重復(fù)序列。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,從10μl —300μl全血樣本中提取的基因組DNA量逐漸增加且呈梯度變化,提取的基因組DNA量具有非常好的線性關(guān)系,而且提取的基因組DNA具有良好的擴(kuò)增效果(見圖1、2和3,表1)。
圖1. 試劑盒提取不同體積全血的基因組DNA電泳圖(泳道M:λDNA/Hind III+EcoR I DNA Marker(Fermentas #SM0191);泳道1-6:分別為提取10μl、50μl、100μl、150μl、200μl和300μl全血的基因組DNA,上樣量為1μl)。
表1. 提取不同體積全血的基因組DNA的濃度測(cè)定結(jié)果
圖2. 不同體積全血中提取的DNA量與全血體積的線性關(guān)系。
圖3. 不同體積全血中提取的基因組DNA的PCR產(chǎn)物電泳圖(泳道M:DL 2000 DNA Marker(TaKaRa D501A);泳道1-6:分別為提取10μl、50μl、100μl、150μl、200μl和300μl全血基因組DNA的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,電泳上樣量為2μl)。
? 試劑盒穩(wěn)定性
用該試劑盒提取200μl人全血樣品,重復(fù)8次。提取的基因組DNA用200μl洗脫液洗脫并取2μl用于PCR擴(kuò)增D12S391重復(fù)序列。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,試劑盒提取全血基因組DNA的量約為4.5μg/200μl全血,提取效果穩(wěn)定(CV<6%),提取的基因組DNA有良好的擴(kuò)增效果(見表2,圖4和圖5)。
表2. 提取全血的基因組DNA的濃度測(cè)定結(jié)果
圖4. 試劑盒提取全血的基因組DNA電泳圖(泳道M:λDNA/Hind III+EcoR I DNA Marker(Fermentas #SM0191);泳道1-8:重復(fù)樣品的基因組DNA,上樣量為2μl)。
圖5. 試劑盒提取的基因組DNA的PCR產(chǎn)物電泳圖(泳道M:DL 2000 DNA Marker(TaKaRa D501A);泳道1-8:重復(fù)樣品基因組DNA的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;泳道9:陽性對(duì)照;泳道10:陰性對(duì)照;電泳上樣量為2μl)。
? 提取1ml全血
用AllMag?全血基因組DNA提取試劑盒提取分別提取200μl和1000μl全血的基因組DNA。所有試劑體系和磁珠用量都按比例放大,所得的基因組DNA分別用100μl和500μl洗脫液洗脫,每種處理重復(fù)4次。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,大體系(1000μl全血)和小體系(200μl全血)提取全血基因組DNA的效果相近,試劑體系按比例放大不會(huì)影響提取效果,表明該試劑盒能夠依據(jù)客戶的需求進(jìn)行不同體積全血的基因組DNA提取(見圖6和圖7)。
圖6. 試劑盒進(jìn)行大體系和小體系提取全血的基因組DNA電泳圖(泳道M:λDNA/Hind III+EcoR I DNA Marker(Fermentas #SM0191);泳道1-4:重復(fù)樣品的基因組DNA,上樣量為1μl)。
圖7. 大體積和小體積提取全血的基因組DNA效果比較。
? 與其他產(chǎn)品比較
AllMag?全血基因組DNA提取試劑盒與著名生物試劑公司A的同類產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)比,提取200μl全血的基因組DNA,每種試劑盒4個(gè)重復(fù)。試劑盒操作流程分別按照各自的產(chǎn)品說明書進(jìn)行。結(jié)果顯示,AllMag?全血基因組DNA提取試劑盒的應(yīng)用效果與A公司試劑盒一致。
圖8. AllMag?全血基因組DNA提取試劑盒與國外試劑的提取效果比較。